現代四弦琵琶的常用定弦，由最粗的纏弦到最細的子弦是 A2、D3、E3、A3（老弦 D3、中弦 E3），也就是 A–d–e–a：纏弦和子弦相差八度，老弦和中弦只差一個全音。這個琵琶調音器按這四個音逐弦對照。
常聽到的「D調定弦」「G調定弦」，指的是同一組空弦在不同調性下的唱名：D調唱 5 1 2 5，G調唱 2 5 6 2。空弦的實際音高不變，只有少數曲子會改定弦。
使用方法
- 允許使用麥克風，從纏弦（第4弦）開始彈空弦。
- 偏低就轉緊弦軸，偏高就放鬆；接近時改用小幅度微調。
- 四條弦都轉綠後，再比對纏弦和子弦的八度檢查一次。
特殊定弦
劉德海編曲的〈瀏陽河〉把纏弦降一個全音成 G2，定弦變成 G–d–e–a，可在選單切換；吳俊生〈火把節之夜〉用 F♯–B–e–a，請用半音階調音器對照。演奏完記得調回 A–d–e–a。
小技巧
- 琵琶的弦軸靠摩擦固定，轉的時候一邊往內推，才不會鬆脫。
- 國樂團通常以 A＝442 Hz 為準，可以在基準音改成 442。
- 纏弦的低音較弱，手機靠近琴身面板，彈完讓聲音延長再看讀數。
常見問題
琵琶四根弦是什麼音？
第4弦到第1弦：纏弦 A2、老弦 D3、中弦 E3、子弦 A3。
子弦、中弦、老弦、纏弦是哪幾條？
子弦最細、音最高，是第1弦；接著是中弦、老弦，最粗的纏弦是第4弦。
D調定弦和 G調定弦要重新調弦嗎？
不用，兩者空弦都是 A D E A，只是唱名不同。只有像〈瀏陽河〉這種特別註明定弦的曲子才要改變音高。
南管琵琶、五弦琵琶能用嗎？
南管琵琶的音高和定弦與現代琵琶不同，五弦琵琶也多一條弦，請改用半音階調音器，依老師給的音對照。